Краски, применяемые в микробиологической практике
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №2
Тема: Строение и химический состав бактериальной клетки. L-формы бактерий, возбудителей заболеваний человека. Тинкториальные свойства бактерий, окраска по методу Грама и другие сложные методы окраски.
Цель: Изучить строение клеточной стенки микроорганизмов. Освоить сложные методы окраски для выявления отдельных органоидов бактериальной клетки.
Знать:
· Строение клеточной стенки бактерий. Химический состав и функциональное назначение.
· Особенности строения и химического состава клеточной стенки у грамположительных и грамотрицательных бактерий.
· L-формы бактерий. Особенности оболочки этих форм бактерий. Факторы, которые влияют на образование протопластов и сферопластов.
· Этапы окраски по Граму.
· Механизм дифференциальной окраски по Граму.
· Капсула и ее биологическая роль для бактериальной клетки. Химический состав капсулы.
· Внутриклеточные включения. Биологическая роль в жизнедеятельности бактерий. Методы выявления.
· Биологическое значение спор и условия их образования.
· Чем обусловлена термоустойчивость спор?
· Функция и строение жгутиков бактерий. Методы их выявления.
· Уметь проводить дифференциацию бактерий по тинкториальным свойствам.
· Владеть техникой контрастирования капсул у бактерий по Бурри-Гинсу.
· Овладеть техникой изготовления мазка из агаровых культур бактерий.
· Приготовить препарат и окрасить его с целью выявления спор в культуре микроорганизмов.
· Уметь окрасить препарат для дифференциальной окраски по Граму.
· Выявить наличие жгутиков в культуре с помощью метода Леффлера.
· Какие компоненты составляют оболочку бактерий, какой из них определяет тинкториальные свойства бактерий?
· Каковы методики окраски микроорганизмов сложными методами окраски?
· В чем сущность окраски по Граму?
· Как контролируется правильность окраски по Граму?
· Кислотоустойчивые бактерии. Особенности химического состава клеточной стенки.
· Споры у бактерий. Их биологическое значение и условия образования.
· Методы выявления кислотоустойчивых бактерий и спор.
· Морфология микоплазм. Особенности ультраструктуры.
· Функция и строение жгутиков бактерий. Методы их выявления.
Краски, применяемые в микробиологической практике
Для окрашивания микроорганизмов используют анилиновые красители (основные, кислые и нейтральные). Микроорганизмы лучше окрашиваются основными красками. Для окраски препаратов готовят спиртовые, водно-спиртовые и водные растворы. В некоторых случаях добавляют в качестве протравы карболовую кислоту, щелочь и др. Наиболее часто употребляемыми красителями являются следующие:
синие — метиловый синий, водный синий, опаловый синий;
красные — фуксин основной, конго красный, сафранин, нейтральный красный, фуксин кислый;
Кто создал научную микробиологию?
Общая микробиология
2. Микроскопическим методом изучают свойства бактерий:
3. Оптическая часть светового микроскопа включает все, к р о м е:
4. Механическая часть светового микроскопа представлена:
5. Увеличение светового микроскопа равно:
а) произведению увеличения объектива на увеличение окуляра
6. Разрешающая способность светового микроскопа – это:
а) способность давать раздельное изображение двух близко расположенных точек
7. Световая микроскопия включает в себя следующие разновидности:
а) фазово-контрастную микроскопию
б) темнопольную микроскопию
в) микроскопию в затемнённом поле
г) иммерсионную микроскопию
8. К специальным методам микроскопии относится все, к р о м е:
9. Принцип темнопольной микроскопии основан на:
б) дифракции света при боковом освещении объекта
10. Темнопольная микроскопия применяется для изучения:
б) бледной трепонемы
11. К преимуществам люминесцентной микроскопии относится все, к р о м е:
д) определение биохимической активности
12. Предел разрешения светового микроскопа:
13. Предел разрешения человеческого глаза:
14. Разрешающая способность светового микроскопа зависит от всего ниже перечисленного, к р о м е:
а) увеличения микроскопа
15. Достоинство иммерсионной системы заключаются в:
а) увеличении разрешающей способности светового микроскопа
16. Принцип деления на простые и сложные методы окраски:
в) количество используемых красителей
17. Сложные методы окраски используют для изучения:
г) структуры микробной клетки
18. Основной метод окраски при диагностике инфекционных заболеваний:
19. Основной метод окраски при диагностике инфекционных заболеваний:
20. Фиксация препарата позволяет все, к р о м е :
д) увеличить предел разрешения микроскопа
21. При химическом способе фиксации используют все, к р о м е:
22. Морфология бактерий зависит от:
в) клеточной стенки
23. По форме микроорганизмы подразделяются на:
г) кокки, палочки, извитые
24. К извитым бактериям относятся:
25. К палочковидным бактериям относятся:
26. К кокковым формам микроорганизмов относятся:
27. К шаровидным бактериям относятся:
28. Достоинства микроскопического метода диагностики инфекционных заболеваний:
а)возможность ускоренной диагностики
б)простота и доступность метода
в)при некоторых заболеваниях имеет самостоятельное диагностическое значение
г)позволяет выявить клинически значимое количество условно-патогенных микроорганизмов
29. К числу недостатков микроскопического метода диагностики инфекционных заболеваний относится (кроме):
д) простота и доступность метода
30. Последовательность использования реактивов при окраске по методу Грама:
в) генциан-виолет, раствор Люголя, этиловый спирт, вода, раствор фуксина, вода
31. Нативные препараты бактерий используют для изучения:
32. При иммерсионной микроскопии используют:
б) объектив х90, плоское зеркало, конденсор на уровне предметного столика
33. Использование фиксированных окрашенных препаратов позволяет все, к р о м е:
в) определить подвижность микроорганизмов
34. Для изучения фиксированных препаратов, в основном, используют микроскопию:
35. Окраска по методу Грама зависит от:
д) состава и строения клеточной стенки
36. Тип микроскопии нативных препаратов:
37. Метод Грама имеет диагностическое значение для:
38. Минимальное количество микроорганизмов в исследуемом материале, выявляемое микроскопически:
39. Критический уровень обсемененности ткани раны составляет (микробных тел на 1 г ткани):
г) 105-106 микр/г ткани
40. Клинически значимое количество условно-патогенных микроорганизмов:
41. Первооткрыватель микроорганизмов:
42. Окрашивание микроорганизмов анилиновыми красителями введено в микробиологическую практику:
43. Форму бактерий определяет:
д) клеточная стенка
44. Метод дифференциальной окраски, основанный на наличии и особенностях состава клеточной стенки, разработан:
45. Обязательные структуры бактериальной клетки (к р о м е):
46. Необязательные структуры бактериальной клетки (к р о ме):
47. Окраска по методу Грама обусловлена:
б) клеточной стенкой
48. Клеточной стенки не имеют:
49. Клеточная стенка бактерий (к р о м е):
а) участвует в энергетическом обмене
50. Для клеточной стенки грамположительных бактерий верно все, к р о м е:
51. Для клеточной стенки бактерий не характерно:
г) участвует в синтезе белка
52. Капсула – дифференциальный признак:
д) клебсиелл, пневмококков
53. Капсула бактерий:
г) фактор вирулентности
54. Капсула бактерии содержит:
55. Капсулу выявляют при окраске методом :
56. При окраске по методу Зырянова используют:
г) нормальную сыворотку, карболовый фуксин
57. Назовите метод окраски, применяемый для возбудителей туберкулеза:
58. Преимущественное использование негативных методов выявления капсул связано с:
г) низким сродством к красителям
59. Жгутики бактерий:
б) состоят из белка флагеллина
60. По расположению жгутиков различают бактерии (к р о ме):
61. О подвижности бактерий свидетельствует:
в) диффузный рост в столбике полужидкогоагара
62. Подвижность бактерий определяют (к р о м е) :
б) по слизистому росту
63. Споры бактерий:
в) покоящиеся репродуктивные клетки
64. Споры окрашивают:
в) методом Тружильо
65. Споры бактерий (к р о м е):
а) характерны только для патогенных бактерий
66. Резистентность спор обусловлена (к р о м е):
г) тейхоевыми кислотами
67. Споры образуют:
б) бациллы, клостридии
68. Споры бактерий (к р о м е) :
г) активно метаболизируют
69. Особенность структуры прокариот:
70. Гранулы волютина содержат:
71. Метод Нейссера используют для выявления:
72. Основная функция половых пилей:
в) участие в передаче генетического материала
73. L – формы бактерий:
г) образуются под действием антибиотиков
74. L-формы бактерий:
в) форма ускользания от иммунного надзора
75. Для L – форм бактерий характерно все, к р о м е :
а) вызывают острые инфекции
76. Для прокариот характерно всё, к р о м е :
а) дифференцированного ядра
77. К микроорганизмам с прокариотным типом организации клетки относятся:
78. Особенности эукариот:
б) имеют дифференцированное ядро
79. Знание структуры бактерий позволяет все, к р о м е :
а) оценить иммунный статус организма
80. К грамотрицательным бактериям относятся:
81. Состав клеточной стенки грамположительных бактерий (кроме):
82. Состав клеточной стенки грамотрицательных бактерий (к р о м е):
в) тейхоевые кислоты
Наследственная информация бактерий кроме нуклеоида локализована в:
83. Плазмиды:
в) внехромосомный фактор наследственности
84. Плазмиды детерминируют:
б) лекарственную устойчивость
85. Функция ЦПМ:
г) участвует в энергетическом обмене
86. Споры бактерий:
в) покоящиеся репродуктивные клетки
87. Внутрицитоплазматические включения бактерий:
а) запасные питательные вещества
88. Зерна волютина – дифференциальный признак:
в) коринебактерий дифтерии
89. Поверхностные структуры бактерий (к р о м е) :
90. Функция капсулы бактерий:
91. Жгутики бактерий (к р о м е) :
г) окрашиваются простыми методами
92. Знание структуры бактерий позволяет все, к р о м е :
г) оценить гормональный статус организма
93. Структуры бактерий – мишени для антимикробных препаратов (к р о м е) :
94. Дифференциально-диагностическое значение имеет выявление:
95. Спорообразование характерно для:
Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Студалл.Орг (0.016 сек.)
Общая микробиология
Микроскопическим методом изучают свойства бактерий:
Правильный ответ: а
Оптическая часть светового микроскопа включает все, к р о м е:
Правильный ответ: г
Увеличение светового микроскопа равно:
а) произведению увеличения объектива на увеличение окуляра
б) разности между увеличением объектива и окуляра
в) сумме увеличений объектива и окуляра
г) увеличению объектива
д) увеличению окуляра
Правильный ответ: а
К специальным методам микроскопии относится все, к р о м е:
Правильный ответ: д
Принцип темнопольной микроскопии основан на:
а) люминисценции объекта
б) дифракции света при боковом освещении объекта
в) интерференции световых волн
г) поглощении света объектом
д) пропускании света объектом
Правильный ответ: б
К преимуществам люминесцентной микроскопии относится все, к р о м е:
а) цветное изображение
б) высокая степень контрастности самосветящихся объектов
в) возможность исследования живых и фиксированных объектов
г) обнаружение локализации отдельных микробов
д) определение биохимической активности
Правильный ответ: д
Предел разрешения светового микроскопа:
Правильный ответ: в
Предел разрешения человеческого глаза:
Правильный ответ: а
Разрешающая способность светового микроскопа зависит от всего нижеперечисленного, к р о м е:
а) увеличения микроскопа
б) длины волны используемого источника света
в) числовой апертуры объектива
г) угла линзы объектива
д) показателя преломления среды
Правильный ответ: а
Принцип деления на простые и сложные методы окраски:
а) морфология бактерий
б) способ микроскопии
в) количество используемых красителей
г) стоимость красителей
Правильный ответ: в
Основной метод окраски при диагностике инфекционных заболеваний:
а) окраска гематоксилином
б) окраска азур-эозином
в) окраска фуксином
Правильный ответ: г
Фиксация препарата позволяет все, к р о м е :
а) снизить риск заражения
б) увеличить контрастность препарата
в) прикрепить микробные клетки к стеклу
г) улучшить проникновение красителей внутрь клетки
д) увеличить предел разрешения микроскопа
Правильный ответ: д
При химическом способе фиксации используют все, к р о м е:
б) смеси Никифорова (равные объемы этилового спирта и эфира)
в) метилового спирта
д) паров осьмиевой кислоты
Правильный ответ: а
Морфология бактерий зависит от:
а) состава питательной среды
б) консистенции питательной среды
в) клеточной стенки
г) используемых красителей
д) способа фиксации препарата
Правильный ответ: в
По форме микроорганизмы подразделяются на:
а) диплококки, стрептококки. стафилококки
б) бациллы, бактерии
в) палочки, кокки, микоплазмы
г) кокки, палочки, извитые
д) клостридии, бациллы
Правильный ответ: г
Достоинства микроскопического метода диагностики инфекционных заболеваний:
а) возможность ускоренной диагностики
б) простота и доступность метода
в) при некоторых заболеваниях имеет самостоятельное диагностическое значение
г) позволяет выявить клинически значимое количество условно-патогенных микроорганизмов
д) все вышеперечисленное
Правильный ответ: д
К числу недостатков микроскопического метода диагностики инфекционных заболеваний относится все, к р о м е:
а) использование в ограниченных случаях
б) возможность определения только морфо-тинкториальных свойств микроорганизмов
в) зависимость результата от качества микропрепарата
г) зависимость результата от исследуемого материала
д) простота и доступность метода
Правильный ответ: д
Последовательность использования реактивов при окраске по Граму:
а) раствор фуксина, этиловый спирт, раствор Люголя, генциан-виолет, вода
б) генциан-виолет, этиловый спирт, раствор Люголя, раствор фуксина, вода
в) генциан-виолет, раствор Люголя, этиловый спирт, вода, раствор фуксина, вода
г) раствор фуксина, раствор Люголя, этиловый спирт, вода, генциан-виолет
д) раствор Люголя, генциан-виолет, этиловый спирт, вода, раствор фуксина, вода
Правильный ответ: в
Нативные препараты бактерий используют для изучения:
б) окраски по Граму
г) антигенных свойств
д) чувствительности к антибиотикам
Правильный ответ: а
20. Минимальное количество микроорганизмов в исследуемом материале, выявляемое микроскопически:
Правильный ответ: в
Основной метод окраски при диагностики инфекционных заболеваний:
б) окраска фуксином
в) метод Циля-Нильсена
г) окраска метиленовой синькой
д) метод Романовского
Правильный ответ: а
При иммерсионной микроскопии используют:
а) объектив х40, вогнутое зеркало, спущенный конденсор
б) объектив х90, плоское зеркало, конденсор на уровне предметного столика
в) объектив х8, вогнутое зеркало, спущенный конденсор
г) объектив х90, вогнутое зеркало, конденсор на уровне предметного столика
д) объектив х90, плоское зеркало, спущенный конденсор
Правильный ответ: б
Использование фиксированных окрашенных препаратов позволяет все, к р о м е:
а) изучить тинкториальные свойства микроорганизмов
б) уменьшить риск заражения
в) определить подвижность микроорганизмов
г) изучить морфологию микроорганизмов
д) изучить структуру микроорганизмов
Правильный ответ: в
Механическая часть светового микроскопа представлена:
Правильный ответ: б
Разрешающая способность светового микроскопа – это:
а) способность давать раздельное изображение двух близко расположенных точек
б) возможность наблюдать движение объекта
в) возможность определять размеры объекта
г) показатель преломления иммерсионной системы
д) увеличение, которое позволяет рассмотреть объект
Правильный ответ: а
Достоинство иммерсионной системы заключаются в:
а) увеличении разрешающей способности светового микроскопа
б) получении объемного изображения
в) большем увеличении объектива
г) большем увеличении окуляра
д) использовании УФ-лучей
Правильный ответ: а
Для изучения фиксированных препаратов, в основном, используют микроскопию:
Правильный ответ: б
Сложные методы окраски используют для изучения:
а) подвижности бактерий
б) биохимических свойств бактерий
в) антигенных свойств бактерий
г) структуры микробной клетки
д) вирулентности бактерий
Правильный ответ: г
Окраска по Граму зависит от:
а) морфологии бактерий
б) способа получения энергии
в) строения цитоплазматической мембраны
г) состава питательной среды
д) состава и строения клеточной стенки
Правильный ответ: д
Тип микроскопии нативных препаратов:
г) невооруженным глазом
Правильный ответ: а
Метод Грама имеет диагностическое значение для:
Правильный ответ: б
Клинически значимое количество условно-патогенных микроорганизмов:
Правильный ответ: д
Правильный ответ: в
К извитым бактериям относятся:
Правильный ответ: г
Окрашивание микророганизмов анилиновыми красителями введено в микробиологическую практику:
в) А. ван Левенгуком
Правильный ответ: а
К палочковидным бактериям относятся:
Правильный ответ: в
К шаровидным бактериям относятся:
Правильный ответ: б
Форму бактерий определяет:
д) клеточная стенка
Правильный ответ: д
Метод дифференциальной окраски, основанный на наличии и особенностях состава клеточной стенки, разработан:
а) А. ван Левенгуком
Правильный ответ: б
Последовательность использования реактивов при окраске по Граму:
а) раствор фуксина, этиловый спирт, раствор Люголя, генциан-виолет, вода
б) генциан-виолет, этиловый спирт, раствор Люголя, раствор фуксина, вода
в) генциан-виолет, раствор Люголя, этиловый спирт, вода, раствор фуксина, вода
г) раствор фуксина, раствор Люголя, этиловый спирт, вода, генциан-виолет
д) раствор Люголя, генциан-виолет, этиловый спирт, вода, раствор фуксина, вода
Правильный ответ: в
Обязательные структуры бактериальной клетки (верно все, к р о м е):
Методические указания. 1.Анилиновые красители используются при светлопольной микроскопии для окрашивания микроорганизмов, имеющих клеточное строение
1.Анилиновые красители используются при светлопольной микроскопии для окрашивания микроорганизмов, имеющих клеточное строение, для более качественного наблюдения их морфологии и выявления отдельных субклеточных структур.
В микробиологической практике наиболее часто используются следующие анилиновые красители: I) красные (фуксин основной, фуксин кислый, сафранин, нейтральный красный, конгорот); 2) синие (метиленовый и толуидиновый синие и др.); 3) фиолетовые (генциан фиолетовый, метиловый фиолетовый, кристаллический фиолетовый); 4) желто-коричневые (везувин, хризоидин); 5) зеленые (бриллиантовый зеленый, малахитовый зеленый).
Из перечисленных анилиновых красителей готовят основные насыщенные спиртовые растворы, которые могут храниться длительное время. Для приготовления рабочих растворов основной насыщенный спиртовый раствор красителя разводят дистиллированной водой в соотношении 1:10.
2. На чистое предметное стекло нанести каплю воды. Прокаленной и остуженной петлёй захватить очень небольшое количество микробной массы и коснуться ею капли так, чтобы оставить в ней облачко помутнения. Прокалить и остудить петлю и, перемешав каплю, размазать ее тонким слоем по стеклу, после чего петлю снова прокалить и поставить в штатив.
Подсушить приготовленный мазок на воздухе. Зафиксировать мазок путем проведения нижней стороной через пламя 3-4 раза. Фиксирование считается хорошим, если стекло, приложенное к тыльной поверхности кисти, дает ощущение легкого жжения. При отсутствии такого ощущения препарат может смыться, а при ощущении ожога микроскопическая картина будет искажена.
Положить препарат на мостик для окраски мазком вверх и окрасить нужным методом. После окрашивания тщательно промыть препарат водой и обсушить препарат, аккуратно промокая (но не вытирая!) фильтровальной бумагой. Микроскопировать с иммерсионным объективом. Микроскопическую картину зарисовать в тетрадь.
3. Окраска по Граму (в модификации Синева) производят следующим образом. Из исследуемого материала готовят тонкий препарат-мазок, высушивают его на воздухе и фиксируют на пламени спиртовки.
На препарат кладут кусочек фильтровальной бумаги, пропитанной карболовым раствором генцианвиолета, и увлажняют его 2-3 каплями воды. Окрашивание продолжается 2 мин.
Сбросив пинцетом фильтровальную бумагу, на препарат наливают на 2 мин. раствор Люголя. Слив раствор Люголя, не промывая препарат, наливают на него для обесцвечивания несколько капель 96 ° спирта на 30 сек (обесцвечивание должно производиться при покачивании стекла).
Быстро смыв спирт водой, препарат докрашивают раствором фуксина Пфейффера в течение 1-2 мин., после чего промывают водой и высушивают.
Приготовленный таким образом тройной препарат-мазок подсушивают на воздухе, фиксируют на пламени спиртовки и окрашивают как один мазок, чтобы соблюсти одинаковые условия. Лишь при правильной окраске контролей (темно-фиолетовый стафилококк и розовая кишечная палочка) можно считать правильной и окраску среднего мазка, то есть изучаемой культуры.
Из трёх культур приготовить на одном стекле мазки, зафиксировать и окрасить по Граму, промикроскопировать под иммерсией и зарисовать.
 |  |  |
| Окраска по Граму | ||
| Стафилококк Staphylococcus | Исследуемая культура _____________________ | Кишечная палочка Escherichia coli |
4. Окраска зерен волютина
5. Окраска капсул по методу Бурри-Гинса.
На предметное стекло нанести каплю туши, внести в нее небольшое количество исследуемой культуры с помощью бактериальной петли, тщательно перемешать. Ребром второго предметного стекла сделать мазок, как для исследования крови. Высушить мазок на воздухе и зафиксировать на пламени спиртовки. Нанести на мазок несколько капель водного фуксина на 2-3 минуты, затем промыть, высушить и промикроскопировать. На фоне туши четко видны окрашенные фуксином бактериальные клетки, окруженные светлым овалом (капсулы). Зарисовать препарат.
6. В препарате «раздавленная капля» споры, обладающие более высоким коэффициентом преломления, выглядят в виде блестящих или темных (в зависимости от фокусировки объектива) образований, отличающихся от более тусклых и неясно очерченных тел бактерий.
При окраске фуксином Пфейффера споры не окрашены и выглядят в виде бесцветных овальных образований, расположенных внутри окрашенных клеток или свободно лежащих между клетками.
 |  |  |
| Зёрна волютина (окраска по Нейссеру) Lactobacterium bifidum | Зёрна волютина (окраска по Лёффлеру) Corynebacterium diphtheriae | Капсулы бактерий (окраска по Бурри-Гинсу) Klebsiella pneumoniae |
 |  |  |
| Споры бактерий у Streptobacillus | ||
| «раздавленная капля» | окраска фуксином | окраска по Клейну |
7. Демонстрация электронограмм ультратонких срезов различных видов бактерии. Определить на электронограммах клеточную стенку, цитоплазматическую мембрану, мезосомы, рибосомы и нуклеоид (ядерную вакуоль).
Контрольные вопросы
Какие основные красители красного, синего, фиолетового и коричневого цвета применяются в микробиологии?
Как готовится концентрированный карболовый раствор основного фуксина и насыщенный раствор метиленового синего?
Какие способы окрашивания микробов Вы знаете?
Из каких последовательных этапов складывается приготовление препарата-мазка?
Для чего необходима фиксация препарата-мазка?
Какие способы фиксации препаратов Вы знаете?
Как производится фиксация на пламени и как контролируется ее качество?
Как определить, на какой стороне стекла находится мазок?
В чем заключается принцип окраски по Граму?
В какой цвет окрашены грамположительные бактерии и почему?
Какова методика окраски по Граму?
Как контролируется правильность окраски по Граму?
Почему зерна волютина окрашенные метиленовым синим, получили название метахроматических?
Какие образования составляют оболочку бактерий?
Что представляют собой цитоплазматическая мембрана, клеточная стенка и капсула?
Какие включения могут быть в цитоплазме бактерий?
Какую роль играют капсулы у патогенных бактерий?
По каким признакам можно заподозрить наличие капсул в микробной культуре?
Что такое споры бактерий, каковы их свойства?
Как можно заподозрить наличие опор в микробной культуре?
Каковы принципы окраски капсул у бактерии?
Каковы принципы окрашивания спор у бактерий?
С чем связана высокая терморезистентность спор?
Какова структура пептидогликана?
Каковы функции клеточной стенки бактерий?
Каковы функции цитоплазматической мембраны?
Что такое рибосомы?
Приложение к ЗАНЯТИЮ 3.
Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет